转基因植株的分子检测 急！

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植物细胞经载体法间接或物化法直接转化后，大部分细胞是没有转化的，这就需要将这些未转化细胞与极少数转化细胞区别开来，淘汰未转化细胞，然后利用植物细胞的全能性在适宜的环境条件下，使转化细胞再生成可育的转基因植株。这一过程通常采用筛选标记基因（screenable marker gene），如抗菌素抗性基因、抗除草剂基因等来进行。当受体细胞本身不含此类基因时，导入含有或构建有此类基因的供体后，只要其在受体中转化成功，便可用抗菌素或除草剂等进行筛选。由于含除草剂的基因工程植物对人畜无毒害等副作用，是人们喜爱选用的筛选标记。

此外，外源基因是否导入成功，还必须对所获得的转基因植株进行检测才能确定。检测的方法很多，但目的不外乎是检测外源基因是否整合到植物基因组中，是否转录和翻译出蛋白产物，以及转译的水平。

1．外源基因整合到植物基因组的检测

Southern杂交、多聚酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR）、报告基因（reporter gene）检测等都是检测外源基因整合到植物基因组中的有效方法。Southern杂交是DNA－DNA杂交，它是将凝胶分离的DNA通过毛细管作用将其转移到硝酸纤维膜上，保持其相对位置不变，然后根据碱基互补原理把固定的DNA与标记（如同位素、生物素等）过的探针杂交，从而检测酸中是否存在特定DNA序列。它不仅可以验证外源DNA是否整合，还可初步估计插入的拷贝数。PCR检测则是针对外源基因的序列，设计一对或多对特异引物，对提取的待检测DNA的进行PCR扩增，进而通过凝胶电泳分离检测其特异条带的有无，来证明外源基因是否整合进入受体植株的基因组。报告基因通常是编码一个在离体条件下易于检测的酶，或者最好是可以在活体条件下进行组织化学定位，这样就可以提供定量的和定性的信息，显示外源基因是否导入。常用的报告基因有 Nos、Ocs、Luc（luciferase，萤光素酶）和GUS（β-glucuronidase，β-葡糖醛酸糖苷酶）基因等。

2．外源基因在植物基因组中转录的检测

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