请问如何将连接PYES载体的基因转入酵母中？

来源：百度知道 编辑：UC知道 时间：2024/09/22 04:26:36
酵母的菌种用什么比较适合。。
转入方法是什么？
该种菌种的培养方法。。以及怎么检测呢。。

在线等。。谢谢。。
QQ：75793488。。不好意思。。我是新手。。但我不知道怎么办。。才来这里问了。。谢谢各位了。。。

构建EgB酵母表达重组体,并对构建的重组体进行序列分析.方法以原核重组体JM109-pMal2xEgB作为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增EgB片断.目的基因EgB片断插入酵母表达载体pYES2/NTB,再将酵母表达重组体转化DH5a菌,并对转化筛选的重组体进行序列分析.结果共筛选得到16个重组克隆,其中7个克隆证实为EgB正确序列,并与酵母表达载体的开放阅读框(ORF)相一致.结论成功地将细粒棘球蚴抗原B基因构建入酵母表达载体pYES2/NTB的开放阅读框.此重组体可在酵母中进一步表达特异性蛋白.细粒棘球蚴抗原B酵母表达载体的克隆与序列分析

提连接后的质粒,酶切使其线性化,与酵母感受态细胞混合电击转化,在含抗生素的平板上筛选,再PCR筛选
具体请看这个
Invitrogen公司的Easyselect Pichia Expression Kit

A Manual of Methods for Expression of Recombinant Proteins Using pPICZ and pPICZα in Pichia pastoris