T4 dna ligase与T4 dna ligase,with PEG的区别,详细介绍中文

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/07/05 06:20:33
用T4 DNA连接酶时一次需多少ul,多大活力单位,用时多少?请指叫,谢谢!

1、T4噬菌体中可分离出T4DNA连接酶(T4 dna ligase),它既可以连接双链DNA片段互补的粘性末端,也可以连接平末端 ,但连接平末端效率相对比较低。但高温易变质。PCR时用Taq。
2、聚乙二醇在分子、细胞生物上的作用常常是诱导,PEG400比较适合,150摄氏度时也不会变质。能有较强的吸水性、凝聚和沉淀蛋白质,能够有效地促进植物原生质体和动物细胞融合。但貌似有毒。
3、使用T4 DNA连接酶pH为7.5 - 8.0,以Oligo(A)n为底物,看你要多少了,50 ul
250 U可以吧?反正用的不要太大量,商品T4 dna ligase溶在甘油里,如果酶加的过多,过多的甘油会抑制酶的作用,杂质的作用也变得明显。12到14度,反应时间约为16至24小时。要是你有耐心,5摄氏度反应一星期也可以

我就知道这么多,介绍的也不详细,我不是学分子生物的,知道的有限