菜花dna提取实验...请教

几种新材料的DNA粗提取与鉴定介绍

3.1新鲜菜花(或蒜黄、菠菜)DNA粗提取与鉴定

一.材料用具

新鲜菜花(或蒜黄、菠菜)。

塑料烧杯,量筒,玻璃棒,尼龙纱布,陶瓷研钵,试管,试管架,试管夹,漏斗,酒精灯,石棉网,三角架,火柴,刀片,天平。

研磨液,体积分数为95%的酒精溶液,二苯胺试剂,蒸馏水。

二.方法步骤

(1)DNA的粗提取

①准备材料 将新鲜菜花和体积分数为95%的酒精溶液放入冰箱冷冻室,至少24 h。

②取材 称取30 g菜花,去梗取花,切碎。

③研磨 将碎菜花放入研钵中,倒入10 mL研磨液,充分研磨10 min 。

④过滤 在漏斗中垫上尼龙纱布,将菜花研磨液滤入烧杯中(有条件的学校可将滤液倒入塑料离心管中进行离心,用1 000r/min的旋转频率,离心25 min,取上清液放入烧杯中)。在4S冰箱中放置几分后,再取上清液。

⑤加冷酒精 将一倍体积的上清液倒入两倍体积的体积分数为95%的冷酒精溶液中,并用玻璃棒缓缓地轻轻搅拌溶液(玻璃棒不要直插烧杯底部)。沉淀35 min后,可见白色的DNA絮状物出现。用玻璃棒缓缓旋转,絮状物会缠在玻璃棒上。

(2)DNA的鉴定

①配制二苯胺试 剂取0.1 mL B液,滴入到10 mL A液中,混匀。

②鉴定 取4 mL DNA提取液放入试管中,加入4 mL 二苯胺试剂,混匀后观察溶液颜色(不变蓝)。用沸水浴(100 ℃)加热10 min 。在加热过程中,随时注意试管中溶液颜色的变化(逐渐出现浅蓝色)。