UC知道求助~！聚丙烯凝胶银染之后不显色
来源：百度知道 编辑：UC知道 时间：2024/09/20 06:56:44
胶一点反应都没有，完全透明的！！
过程参照：
1 取出电泳后的凝胶，放入染色盒中用蒸馏水洗涤两次。
2 将蒸馏水倒出，加入25%的乙醇变性3mins。
3 回收乙醇，用蒸馏水洗涤凝胶一次，加入1%的硝酸溶液固定约3mins，待溴酚蓝的蓝色大部分褪尽，停止固定。
4 回收硝酸溶液，用蒸馏水洗涤凝胶一次，加入0.2%硝酸银染色约30mins。
.5 回收硝酸银溶液，用蒸馏水洗涤凝胶两次，加入含甲醛（0.2%）3%的碳酸钠溶液显色。待凝胶上显出清晰的DNA带型时，适时倒掉碳酸钠溶液，加入10%的乙酸终止显色反应。
6 将乙酸倒掉，用蒸馏水清洗两次，放入凝胶成像系统的暗箱中，扫描成像。
不知道是不是碳酸钠过期导致的？？请大家指教~~
过程参照：
1 取出电泳后的凝胶，放入染色盒中用蒸馏水洗涤两次。
2 将蒸馏水倒出，加入25%的乙醇变性3mins。
3 回收乙醇，用蒸馏水洗涤凝胶一次，加入1%的硝酸溶液固定约3mins，待溴酚蓝的蓝色大部分褪尽，停止固定。
4 回收硝酸溶液，用蒸馏水洗涤凝胶一次，加入0.2%硝酸银染色约30mins。
.5 回收硝酸银溶液，用蒸馏水洗涤凝胶两次，加入含甲醛（0.2%）3%的碳酸钠溶液显色。待凝胶上显出清晰的DNA带型时，适时倒掉碳酸钠溶液，加入10%的乙酸终止显色反应。
6 将乙酸倒掉，用蒸馏水清洗两次，放入凝胶成像系统的暗箱中，扫描成像。
不知道是不是碳酸钠过期导致的？？请大家指教~~
基本可以确定是你样品或试剂出问题了,不然不会一点颜色都没有,就算条带不清晰,至少加样槽里会有颜色出现.
提以下两个建议:
一:样品DNA浓度太低,或者电泳前就已经分解掉了.检查办法是,电泳前,用分光光度计测一下DNA含量,看是否符合电泳标准;
二:由于某种操作不当,加样时好好的,跑时DNA变性或分解成小片段,全跑胶外头了.我曾经有一次缓冲液没配好,电泳时温度超高,夹子夹的又紧,玻璃板都炸了.....因此你还是要检查一下你电泳时有没有问题?尤其是缓冲液
最后郑重建议你检查一下所用的所有试剂,最简单办法就是统统换新的,一个一个找,麻烦的很.
另外,你要想确定是不是碳酸纳过期,可以把这个胶放EB里染色,看看有没条带~~
确定蛋白没有跑出去吧
很严重的问题，肯定是硝酸银的问题，做银染实验硝酸银溶液一定要现配，实验之前称量，加水溶解，用多少配多少。放置久了会分解的，如果你一定要保存硝酸银溶液的话，以使用浓度的100倍避光保存