免疫组化中制作石蜡切片是按常规方法吗?

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/09/28 11:16:32
能不能给我一个具体的流程,包括脱水透明浸蜡包埋的时间控制等,谢谢~

石蜡切片包括取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。
取材:选取原尾蜥虎,麻醉后迅速解剖,按下列消化道各段取材:食道、胃贲门部、胃体、胃幽门部、十二指肠、空肠、回肠、直肠。
固定:将消化道各段用生理盐水漂洗,然后用10%中性福尔马林固定,固定液的用量通常为材料块的20倍左右,固定时间24小时。
洗涤与脱水:固定后的组织材料用流水冲洗数次。从50%乙醇开始,经70%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、无水乙醇进行逐步脱水,每次时间为35分钟,其中在95%乙醇和无水乙醇处分别进行两次脱水。
透明:将组织先经无水乙醇:二甲苯=1:1的混合液浸20分钟,再转入纯二甲苯中浸10分钟,再重复浸入另一瓶二甲苯中浸10分钟进行适当的透明处理。
浸蜡与包埋:把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍半小时,再先后移入2个熔化的石蜡液中分别浸渍一个半小时,浸蜡在60℃左右的温箱中进行。浸蜡后的组织材料块放在装有蜡液的容器中(用牛皮纸折成的纸盒),同时摆好在蜡中的位置。待蜡液表层凝固迅后速放入冷水中冷却,即做成含有组织块的蜡块。
切片:包埋好的蜡块用刀片修成规整的方形或长方形,以少许热蜡液将其底部迅速贴附于小木块上,夹在轮转式切片机的蜡块钳内,使蜡块切面与切片刀刃平行,旋紧。切片7微米,切出一片接一片的蜡带,用毛笔轻托轻放在纸上。
贴片与烤片:将一定长度蜡带(连续切片)或用刀片断开成单个蜡片于温水(45℃左右)中展平后,捞至玻片上铺正,将载玻片放入60℃恒温箱中烘烤2小时。
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