什么是质粒援救

质粒救援转化是质粒转化枯草杆菌特有的方法。在此转化中，质粒以单链形式进入感受态细胞的。单体质粒DNA和感受态细胞接触时，在核酸酶作用下被切开，只有一条DNA链能够进入细胞。这条链进入细胞后由于没有另外一条质粒DNA链迅速与其配对而被降解，所以没有转化活性。寡聚型的质粒DNA分子在进入感受态细胞以后，线性DNA分子中的同源部分进行分子内的重组，并环化生成一个完整的质粒分子，不会被分解而有转化活性；质粒中如果具有与枯草杆菌同源的部分，质粒单链DNA进入感受态后可以与同源的片段配对形成双链，保护质粒。所以可以通过：1构建寡聚型的质粒DNA分子（酶切后用连接酶连接）；2在质粒中加入同源片段构建杂种质粒（质粒片段越大，转化效率越高。当然是在一定限度内）。这种转化方法称质粒救援转化。

参考资料：枯草芽孢杆菌中的分子克隆和单体杂种质粒转化的研究陈乃用等
应用于发酵工业的DNA重组技术 王贵宏等

应用于基因筛选的穿梭质粒，弥补基因撞击或环境突变、提供基因剂量、促进基因操作，还可以应用于蛋白干扰分析。
质粒拯救我也不熟悉，只知道是反向遗传的一种方法。具体的可以查看:
利用8质粒系统拯救A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)株禽流感病毒 石火英 微生物学报 2005/03
这篇文章有具体的例子。 |