什么是Solexa 测序技术

在solexa测序中一段待测序列会接上2种接头,在flowcell中也有和2种接头互补的两种oligo序列,首先是你的单链序列会和其中一个oligo互补结合,然后合成第二条链,随后将你的第一条链剪掉,碱性溶剂洗去.第二条链就会和第二种接头互补结合,就会形成一种桥型.
成桥有什么优势?成桥后可以控制的去除其中的一条,这样测序就可以完成两头的测序.当然测序长度也就多了一倍.
454测序：DNA文库制备→emPCR→上机测序

Solexa测序：文库制备→Cluster扩增→边合成边测序
SOLiD测序：样品制备→Emulsion PCR和底物准备→测序反应→图像收集→数据分析

　　Solexa 高通量测序法原理

　　Solexa 方法是利用单分子阵列测试 genotyping ，此种测序法首先是将 DNA 从细胞中提取，然后将其打断到约 100 － 200bp 大小，再将接头连接到片段上，经 PCR 扩增后制成 Library 。随后在含有接头的芯片（ flow cell ）上将已加入接头的 DNA 片段绑定在 flow cell 上，经反应，将不同片段扩增。在下一步反应中，四种荧光标记的染料应用边合成边测序（ Sequencing By Synthesis ）的原理，在每个循环过程里，荧光标记的核苷和聚合酶被加入到单分子阵列中。互补的核苷和核苷酸片断的第一个碱基配对，通过酶加入到引物上。多余的核苷被移走。这样每个单链 DNA 分子通过互补碱基的配对被延伸，利用生物发光蛋白，比如萤火虫的荧光素酶，可通过碱基加到引物后端时所释放出的焦磷酸盐来提供检测信号。针对每种碱基的特定波长的激光激发结合上的核苷的标记，这个标记会释放出荧光。荧光信号被 CCD 采集，CCD 快速扫描整个阵列检测特定的结合到每个片断上的碱基。通过上述的结合，检测可以重复几十个循环，这样就有可能决定核苷酸片断中的几十个碱基。

　　Solexa 的这种方法，可在一个反应中同时加入 4 种核苷的标签，采用边合成边测序（ SBS － sequencing by synthesis ），可减少因二级结构造成的一段区域的缺失。并具有所需样品量少，高通量，高精确性，拥有简单易操作的自动化平台和功能强大等特点