花青素含量的测定

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/07/02 12:32:12
使用硫酸香草醛法测定花青素含量,发现在536nm处有最大吸收波长,不加香草醛也是在536nm处有最大吸收波长,花青素的颜色会不会遮盖了花青素和香草醛反应物的颜色(有报道说原花青素和香草醛反应在500nm处有吸收峰)。那还有什么有效地方法来测定花青素(HPLC除外)。

花青素含量的测定方法:

原理:

花青素是植物体内广泛分布的色素之一,属黄酮类化合物,黄酮类化合物在植物生长中起调节作用,已受到人们的重视。花青素在不同pH条件下,呈现不同的颜色,在酸性中为红色,其颜色深浅与花青素含量成比例,用比色法即可进行测定,方法简单易行。

仪器药品:

721型分类光度计   温箱
台天平       剪刀
烧杯        量筒
0.1 mol/L HCl

操作步骤:

称取材料1g,剪成2梍3mm的碎片,置于烧杯中,加入0.1mol/L Hcl 10ml(视花青素含量而增减HCl用量),杯口用称量纸盖紧,以防水分蒸发。置于32℃温箱中,浸渍至少4小时。而后过滤之,取滤液用分光光度计在波长530nm下读取吸光度,以0.1 mol/L Hcl为空白对照,用光径1cm的比色杯。当吸光度A530 为0.1时的花青素浓度称为1个单位,以比较花青素的相对含量。将测得的吸光度乘上10,用以代表花青素的相对浓度单位。

1:原花色素的测定方法(分光光度法)
本方法适用于各种植物组织、器官及其制剂(如葡萄子与松树皮提取物)中原花色素含量的测定。
1. 方法提要
原花色素(也称缩合单宁)是黄烷-3-醇的寡聚体与多聚体,属多酚类化合物。与其他酚类化合物不同,黄烷醇(缩合单宁,单体,双体等)在酸性介质中可与香草醛反应,生成在500nm处有最大吸收的有色物质,可通过比色测其含量。
2. 仪器
分光光度计。
3. 试剂
所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
(1)香草醛、甲醇、浓盐酸均为分析纯级。
(2)提纯的原花色素或儿茶素。
(3)4%香草醛甲醇液。
(4)标准使用液:将提纯的原花色素溶于蒸馏水,制成1mg/mL储备液,将储备液稀至浓度为1×10-2mg/mL至1mg/mL的标准使用液。标准使用液应于测定当天配制。
如无提纯的原花色素,可用儿茶素代替,配制方法同上。
4. 测定步骤
(1)样品中原花色素的制备:植物材料经4倍体