大肠杆菌感受态制备为什么要冰上操作

来源：百度知道 编辑：UC知道 时间：2024/07/01 06:37:01
大肠杆菌感受态制备为什么要冰上操作,0-4℃操作。还有，为什么要采用对数生长期的菌？
不要只给一个简简单单的回答说转化率高，要具体、详细点的，最好有原理，谢谢。

这问题要详细讲起来牵涉到很多其他概念，不知道你的基础如何，我试着归纳一下主要原因吧

先回答第二个问题，用对数期细菌因为对数期细胞生长旺盛，新生细胞壁薄，细胞膜通透性好，外源DNA容易进入，同时意味着各种DNA复制所需的酶在细胞内全数到位，当外源DNA进入后有现成材料可以利用，迅速展开复制，重组等一系列过程，大白话就是这种情况下，外源DNA更容易站稳脚跟，从而转化率也较高。

第一个问题，细菌处于0℃，CaCl2 的低渗溶液中，菌细胞会膨胀成球形，转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面（因为DNase会消化外源DNA，如形成抗DNase的物质有利外源DNA的生存），从低温突然提高到42℃短时间热刺激，应激反应下可产生大量cAMP，而cAMP可改变细胞膜通透性，促使细胞吸收 DNA复合物，从而大大提高转化率。

以上是主要原因，不知你是否还有不明白的地方？

建议你参考一下如下文献：
1. Hanahan D. 1983. Studies on transformation of Escherichia coli with plasmids.J. Mol. Biol. 166:557-580.
2. Hanahan D., Jessee J., and Bloom F.R. 1991. Plasmid transformation of E. coli and other bacteria.Methods Enzymol. 204:63-113.