PCR体系怎么配

来源：百度知道 编辑：UC知道 时间：2024/06/30 16:23:38
PCR was performed in a reaction volume of 25 ll containing PCR reaction buffer (50 mM KCl, 10 mM Tris-HCl, 2.5 mMMgCl2, pH 8.3), 200μMdNTPs, 0.2 μM invA primers, 0.2μM sefA primers, and 0.5 μM pefA primers，2.5U of Taq DNA polymerase (MBI Fermentas), and 0.2μl of DNA template.
这段话怎么翻译啊，这个PCR体系中的10*buffer、dNTP、引物invA、sefA及pefA的体积各是多少，怎么算的啊

在25ul的反应体系中配置，PCR Buffer(组成：50 mM KCl, 10 mM Tris-HCl, 2.5 mMMgCl2, pH 8.3)，
200μM dNTPs(200μM是指25ul体系中的dNTPs的终浓度，下面一样),
0.2 μM invA primers,-----0.2 μM终浓度的配对链引物(即上游引物)
0.2μM sefA primers, -----0.2 μM终浓度的自身链引物(即下游引物)
and 0.5 μM pefA primers，这个不是很清楚，估计是探针的意思
2.5U of Taq DNA polymerase -------2.5U的Taq酶，一般Taq酶都是5U/ul的，所以具体加几微升就要看你买的Taq酶的浓度了，(MBI Fermentas),-----是一家公司的名字
and 0.2μl of DNA template. ------0.2ul DNA模板

再加一句，剩余的体积用无菌水补足25ul

  • 标准的PCR反应体系：10×扩增缓冲液 10ul 
    4种dNTP混合物 各200umol/L 
    引物 各10～100pmol 
    模板DNA 0.2ug 
    Taq DNA聚合酶 2.5u 
    Mg2+ 1.5mmol/L 
    加双或三蒸水至 100ul PCR反应五要素：参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物：引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度.理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增.设计引物应遵循以下原则：①引物长度：15-30bp,常用为20bp左右.②引物扩增跨度：以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段.③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带.ATGC最好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列.④避免引物内部出现二级结构,避免