southern杂交为什么要用高盐溶液
来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/08/22 00:38:19
southern杂交是DNA片段经琼脂糖凝胶电泳分离后转移到固相支持物上的过程。 那个DNA分离时的溶液为什么要高盐啊?
Southern 杂交一般采取的是液-固杂交方式,即探针为液相,被杂交DNA为固相。杂交发生于一定条件的溶液(杂交液)中并需要一定的温度,可以用杂交瓶或杂交袋并使液体不断的在膜上流动。杂交液可以自制或从公司购买,不同的杂交液配方相差较大,杂交温度也不同。下面给出的为一杂交液配方:
PEG 6000 10%;SDS 0.5%;6×SSC;50%甲酰胺。该杂交液的杂交温度为42℃。
1.预杂交
NC膜浸入2×SSC中5min,在杂交瓶中加入杂交液(8cm×8 cm的膜加5ml即可),将膜的背面贴紧杂交瓶壁,正面朝向杂交液。放入42℃杂交炉中,使杂交体系升到42℃。取经超声粉碎的鲑鱼精DNA(已溶解在水或TE中)100℃加热变性5min,迅速加到杂交瓶中,使其浓度达到100μg/ml。继续杂交4hr。鲑鱼精DNA的作用是封闭NC膜上没有DNA转移的位点,降低杂交背景、提高杂交特异性。
2.杂交
倒出预杂交的杂交液,换入等量新的已升温至42℃的杂交液,同样加入变性的鲑鱼精DNA。将探针100℃加热5min,使其变性,迅速加到杂交瓶中。42℃杂交过夜。