(万分火急)转化子的菌落PCR原理是什么?

来源：百度知道 编辑：UC知道 时间：2024/06/28 00:16:42
我看了一些资料,说转化子利用菌落PCR可以做出正确鉴定,避免假阳性克隆,(采用引物载体)哪个大侠能简单明了又准确的给我解释一下原理么?
另外,T7通用引物载体扩增到的片段大小是多少?

如果转化成功的话，菌落里的菌就含有你克隆的质粒载体了，用枪头直接碰一下，然后作为PCR模板，就可以进行PCR扩增了。但是菌落PCR鉴定的假阳性率其实也不低，所以建议你挑取菌落扩培之后抽提质粒，进行酶切鉴定，这样比较准确，酶切鉴定确认好之后再去测序以确定没有碱基突变或缺失。
你说的T7通用引物是指载体上的T7 promtor引物吗？那只是一条引物啊，如果加上GBH下游引物的话，扩增出来的就是你连接进去的目的基因的长度了。

如果转化成功的话，菌落里的菌就含有你克隆的质粒载体了，用枪头直接碰一下，然后作为PCR模板，就可以进行PCR扩增了。但是菌落PCR鉴定的假阳性率其实也不低，所以建议你挑取菌落扩培之后抽提质粒，进行酶切鉴定，这样比较准确，酶切鉴定确认好之后再去测序以确定没有碱基突变或缺失。
你说的T7通用引物是指载体上的T7 promtor引物吗？那只是一条引物啊，如果加上GBH下游引物的话，扩增出来的就是你连接进去的目的基因的长度了。

跟普通PCR的原理一样 只不过模板不同 如果已经成功转化 则含有你的目的片段 就以这个目的片段作为模板来进行扩增