帮忙看看这个PCR反应条件！！！！

来源：百度知道 编辑：UC知道 时间：2024/07/04 14:27:42
F--GGT CCA CAA GCC AGA ATT TCC
R--TGC TGG TCC CTG TGG TTT GC
片段约为386bp，
各位帮忙看看这个的反应条件是什么？谢谢啦！！！！

假设你用BIOTAQ的POL，总反应体积20ul

template DNA: 1ul 浓度无所谓
10uM primer F:0.5ul
10uM primer R:0.5ul
100mM dNTP: 0.5ul
BioTaq: 0.5ul
50mM MgCl: 0.75ul
Water: 16.25

大概就行了，什么.25都可以四舍五入。

thermocylce取决于你PRIMER的Tm，你一个66度，另一个70度，区别比较大而且长度比较短，所我建议用65度。

1.94C 4min
2.94C 1.5min
3.65C 0.5min
4.72C 1min
5.repeat 30 cycles from 2 to 4
6.72C 5min
7.4C hold

先这么做吧，不行再回来问。

这个同道为了个这么模糊的问题，对于PCR的条件基于PCR原理三步骤而设置变性-退火-延伸三个温度点。在标准反应中采用三温度点法，双链DNA在90～95℃变性，再迅速冷却至40 ～60℃，引物退火并结合到靶序列上，然后快速升温至70～75℃，在Taq DNA 聚合酶的作用下，使引物链沿模板延伸。对于较短靶基因(长度为100～300bp时)可采用二温度点法，除变性温度外、退火与延伸温度可合二为一，一般采用94℃变性，65℃左右退火与延伸(此温度Taq DNA酶仍有较高的催化活性)。
我一般用的是退火58，但还是自己慢慢摸索，总结，希望你早日扩增出你想要的片段。

随便什么条件都可以扩增出来,最好退火温度高一些,否则可能有非特异性带