啤酒发酵用麦汁的总糖和可发酵性糖含量的化学测定方法是怎么样的？

采用高效液相色谱(HPLC)法分离单糖和寡糖，较多采用氨基柱，乙腈和水作为流动相，此法具有完全分离麦汁、发酵液和啤酒中的果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和麦芽三糖的优点。本文采用Hypersil NH2柱分析麦汁、发酵液和啤酒中三糖以内的可发酵糖。 至今尚未见到采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法分离测定啤酒中的各种有机酸的报道，本文采用直接RP-HPLC法，应用Nucleosil C18柱，测定啤酒、发醇液和麦汁中的草酸、酒石酸、苹果酸、乳酸、乙酸、柠檬酸等有机酸。 2 实验部分 2.1 药品和试剂 葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、麦芽三糖、木糖、草酸、酒石酸、丙酮酸、苹果酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、琥珀酸、延胡索酸、磷酸氢二钾药品均为分析纯，乙腈为色谱纯。 2.2 仪器与色谱条件 PE200系列高效液相色谱仪(PE公司)；PE200系列泵，ISS200自动进样器，PE101柱炉。(1)可发酵糖 色谱柱：预柱PE PEEK-C18 4.6 mm×10，分析柱Hypersil 5 μm NH2 4.6 mm×250;柱温：30℃；示差折光检测器；流动相：重蒸＋水，流速1 mL/min，进样量均为10 μL。(2)有机酸 色谱柱：预柱PE PEEK-C18 4.6 mm×10,分析柱Nucleosil 5 μm C18 4.6 mm×250；柱温：18℃；二极管阵列检测器检测波长215 nm；流动相：0.1 mol/L磷酸氢二钾，流速0.8 mL/min，进样量均为50 μL。 2.3 样品前处理 测试样品需在室温20±0.5℃平衡后取样，啤酒和发酵液样品纸滤后再膜滤，取入样品瓶后直接进样；麦汁杀菌后离心取上清液依浓度而稀释，先纸滤后再膜滤，取入样品瓶直接进样。 2.4 定性定量方法 (1)可发酵糖 以保留时间(Rt)和标样添加定性，外标法和内标法定量。(2)有机酸 以保留时间、标样添加和各有机酸紫外吸收光谱来定性，外标法定量。 3 结果与讨论 3.1 可发酵糖测定方法 (1)方法的线性关系和最小检测限 配制一定浓度的果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、麦芽三糖，进样体积1 μL～100 μL，进样量C微克(μg)与峰面积(A）之间建立回归方程：以上各种糖的线性范围、回归方程及相关系数r分别为：果糖5～100 μg，C=0.6631+7.642×10－6A,r=0.9999；葡