载体双酶切后消失，怎样解决

来源：百度知道 编辑：UC知道 时间：2024/07/04 06:21:49
我用的是bamh1, xho1两个酶（Fermentas公司的，用的是bufferR），双酶切pFastBac1这个载体，50微升反应体系，只切3个小时，各用1微升的酶，跑胶一点都看不到有大片段，可以看到结果是一很长的一条拖带，不酶切的对照，及t载体对照都用一样的体系却比很明显，已重复至少5次了，觉得是载体被切没有了。请问我该如何改进我的酶切反应，还有就是，是不是pFastBac1这个载体的问题，有没有人做过这个载体，知道是怎么回事吗？

fermentas 目录上有,bamh1 ph大于8.0时有很强的星号活性，bufferR ,ph 8.5,可以换buffer G试下

你还是到丁香网、生物秀那些比较专业的网站去求助吧，那里高手多

我觉得这种专业问题
你不如去生物谷看看
那里要权威的多

温度尽量低，切的时间长一点。。。估计是出信号活性了，我原来切Sma1、Sac1时也出过这事，最后是16度切了22小时才过关。。。切了9次。。
载体我不知道，要不还有个可能，这两个酶的酶切位点过近也是切不出来的，但这个我没亲眼看见，是师姐告诉我的
另外，最好是PCR或提质粒产物不经过冷冻，直接酶切，成功率也会高一点