分离细胞内蛋白质一定要加还原剂吗？不加影响大不？

那要看你是什么蛋白，干什么用的了。
加还原剂主要是保护某些巯基为关键活性基团的蛋白，如果不加还原剂，对这些蛋白活性就会有很大的影响。
蛋白酶钝化剂我觉得没啥必要，只要提取的时候保持低温保持低pH，水解酶活性并不大。

一般还是要加蛋白酶抑制剂的，像PMSF，多少加一点，心里放心。PMSF配成饱和母液，用时按1：200加入即可。

还原剂DDT之类的一般不加，因为如果某些蛋白的活性状态是靠二硫键聚合的多体，加了还原剂就给破坏掉了，有可能拿不到活性蛋白。