菌液pcr为什么会出现大量载体自连的现象

来源：百度知道编辑：UC知道时间：2024/09/26 00:29:30

感觉整个过程没有什么操作错误的地方，PCR检测后切胶回收也有带，低温连接过夜转化挑取24个克隆用载体引物和特异引物筛选都没有结果目的带2K左右而是大部分的载体自连在200bp

问你们导师啊我没在做怎么知道是怎么回事引物加错了？ taq加错了？

是不是酶量过少？？转化时间又过长？

可能是你的目的片断与载体连接时，某个酶切位点没有切开，可能是那个酶失活了，导致黏性末端没露出来，无法酶联。
也可能是酶切时buffer选取不当，酶活不行。