UC知道血浆游离DNA提取？
来源：百度知道 编辑：UC知道 时间：2024/07/07 20:06:30
依据潘世扬教授等人文献：磁珠法提取血浆游离DNA为首选。
但目前，所推荐的浩源试剂盒价位有些高（涨价了），因为磁珠是进口的。我想用国产磁珠试剂盒（上海奥润），但没有专门针对血浆的试剂盒，不知该如何选择，全血DNA试剂盒还是血浆病毒DNA试剂盒？
如何选择，使用时还需注意些什么，请各位高手赐教。另外我想使用前浓缩一下血浆（试剂盒通常要求样本量为200ul），以增加提取DNA量，除了真空干燥器（很费时），还有更好的办法吗？谢谢！
自己顶一下吧，问题确实有些专业。
经查询，试剂盒第一步要加入蛋白酶K、和裂解液。其中蛋白酶K，可以破坏生物膜、消化组蛋白游离DNA；而裂解液包括SDS和缓冲液，SDS可以破坏生物膜，而缓冲液提供合适的PH及盐浓度（具体条件未查到）。其后的磁珠吸附、清洗/洗脱操作过程都是一致的。最终的洗脱过程，磁珠及洗脱液的量可因DNA量的减少而适当减少，但洗脱液一定要没过磁珠滴。因此，应用全血试剂盒提取血浆DNA；1.要加蛋白酶K，但可少加，2.不必加SDS，但一定加缓冲液（即吸附液，合适的PH及盐浓度，促进磁珠吸附DNA），采用上海奥润的磁珠试剂盒裂解液和吸附液分开，单独存在。3.最终洗脱液的量可以适当少加，以保持提取液DNA浓度。
关于浓缩，经查询，考虑先采用透析袋脱水，再用真空泵浓缩。正在尝试中……
----2009.10.22总结
但目前，所推荐的浩源试剂盒价位有些高（涨价了），因为磁珠是进口的。我想用国产磁珠试剂盒（上海奥润），但没有专门针对血浆的试剂盒，不知该如何选择，全血DNA试剂盒还是血浆病毒DNA试剂盒？
如何选择，使用时还需注意些什么，请各位高手赐教。另外我想使用前浓缩一下血浆（试剂盒通常要求样本量为200ul），以增加提取DNA量，除了真空干燥器（很费时），还有更好的办法吗？谢谢！
自己顶一下吧，问题确实有些专业。
经查询，试剂盒第一步要加入蛋白酶K、和裂解液。其中蛋白酶K，可以破坏生物膜、消化组蛋白游离DNA；而裂解液包括SDS和缓冲液，SDS可以破坏生物膜，而缓冲液提供合适的PH及盐浓度（具体条件未查到）。其后的磁珠吸附、清洗/洗脱操作过程都是一致的。最终的洗脱过程，磁珠及洗脱液的量可因DNA量的减少而适当减少，但洗脱液一定要没过磁珠滴。因此，应用全血试剂盒提取血浆DNA；1.要加蛋白酶K，但可少加，2.不必加SDS，但一定加缓冲液（即吸附液，合适的PH及盐浓度，促进磁珠吸附DNA），采用上海奥润的磁珠试剂盒裂解液和吸附液分开，单独存在。3.最终洗脱液的量可以适当少加，以保持提取液DNA浓度。
关于浓缩，经查询，考虑先采用透析袋脱水，再用真空泵浓缩。正在尝试中……
----2009.10.22总结
血浆中游离DNA的提取一般有离心柱型，溶液型和磁珠法三种，原理及步骤基本相同，虽然各公司推出了多种类似产品，让人不知如何去选择，但从原理和操作步骤看，基本就是离心柱型，溶液型或者磁珠法。
一般来说，离心柱提取纯度高一些，我们实验室用的BIODAI离心法，处理量也能达到1000ul，磁珠法只能处理0.1-0.5ml血液而且样品处理成本较高，磁珠太贵
5741353753473.
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额，貌似是专业人士的问题？