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来源：百度知道 编辑：UC知道 时间：2024/06/30 23:02:40
传统的植物基因工程主要有两个方面：一是改良植物品质，提高作物贮藏蛋白的含量；二是改善植物的抗逆性状，主要是抗病虫害、抗旱、抗盐等。随着转基因表达系统和遗传转化技术的发展，植物生物反应器与微生物和动物反应器相比具有更大的优点，它可大规模、廉价地生产外源蛋白，为医学研究及临床治疗提供“原料”，还可避免动物病原体的污染，而且方便产品的储藏和运输。若选用可直接食用的植物为载体还可省去提取步骤，减少损失量和加工成本。因此利用转基因植物作为一种生物反应器生产药用蛋白已成为植物基因工程中一个新的生长点。白血病抑制因子（LIF）和乳铁蛋白肽（LFC）都是具有多种生物学功能的蛋白，对生物医学研究和临床治疗与应用都有重要意义，因此本文以这两种蛋白为代表研究外源基因在植物中的表达情况。
白血病抑制因子基因在人和多种动物中均有发现，它是一种具有多种生物学功能的细胞因子，LIF能够促进造血细胞的生长与增殖，使白血病细胞生长受到抑制，同时诱导或协同诱导其分化。本文所用基因是人类基因组中发现并克隆出来的，要研究其在植物中的表达情况，首先要将该基因转入植物中。这部分主要研究结果如下：
①设计一对引物扩增pcDNA6/lif中的lif基因，在其两端加入酶切位点，便于以后的操作，测序发现扩增的序列与原序列相比有一个碱基发生突变，但所翻译的氨基酸没有变化。
②所得基因连接到pCAMBIA-3301载体上，验证后转化到烟草无菌叶片中，在叶片的不断分化生根过程中筛选抗性植株，最终获得19株抗性苗。
③提取抗性烟草基因组DNA做PCR扩增和Southern blotting，发现目的基因已经整合到烟草基因组中。
④提取部分抗性烟草总RNA做Northern blotting，发现该基因在RNA水平上有一定的表达
⑤提取抗性烟草叶片蛋白进行LIF的活性测定，大部分外源蛋白都不同程度的抑制白血病细胞的生长和存活，这说明在烟草中表达的白血病抑制因子具备生物活性。
乳铁蛋白是一种糖蛋白，为转铁蛋白家族的成员，在人和哺乳动物的许多器官与组织中广泛分布，乳铁蛋白具有多种生物功能，其中抗菌功能尤其重要，而研究表明其水解肽段比乳铁蛋白本身的抗菌能力提高400倍，因此研究其抗菌功能主要针对水解的抗菌肽段，由于外源蛋白在植物中的表达量很低，所以本研究尝试将短小

Traditional plant genetic engineering has two main aspects: First, improved plant quality, increase crop storage protein content of the plant is to improve the resistance-mainly against plant diseases and insect pests, drought, salt, etc.. With transgenic expression system and the development of genetic transformation technologies, bioreactor plants and animals and microbes reactor greater than the advantages it can be a large-scale, low-cost source of protein production for medical research and clinical treatment " raw materials ", but also to avoid the pollution of animal pathogens, but also to facilitate the storage and transportation products. If the choice can be directly consumed by the plant could also save as the carrier extraction steps to reduce processing costs and loss. Therefore the use of transgenic plants as a bioreactor production of medicinal plant genetic engineering has become a new growth point in. Leukemia inhibitory factor (LIF) and lactoferrin peptid