过氧化氢酶的测定
来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/09/24 08:28:34
你好!!
使用过氧化氢酶检测试剂盒是比较简便的方法:
过氧化氢酶检测试剂盒(Catalase Assay Kit)是一种简单易行的通过显色反应来检测细胞、组织或其它样品中过氧化氢酶
(Catalase)活性的试剂盒。在过氧化氢相对比较充足的情况下,过氧化氢酶可以催化过氧化氢产生水和氧气。残余的过氧化
氢在过氧化物酶(Peroxidase)的催化下可以氧化生色底物,产生红色的产物(N-(4-antipyryl)-3-chloro-5-sulfonate-p-
benzoquinonemonoimine),最大吸收波长为520nm。用过氧化氢标准品,制作标准曲线,这样就可以计算出样品中的过氧化氢
酶在单位时间单位体积内催化了多少量的过氧化氢转变为水和氧气,从而可以计算出样品中过氧化氢酶的酶活力。
Ø 过氧化氢酶分布非常广泛。在肝脏、肾脏和红细胞中,过氧化氢酶的水平非常高,这些器官和细胞是清除能导致氧化损伤的过氧
化氢的主要场所。
Ø 过氧化氢酶的活性也可以用紫外分光光度计测定A240,但蛋白质或其它组份在A240附近都有比较强的吸收,会对测定产生严重干
扰。因此,用紫外法测定过氧化氢酶的活性,比较适合纯化的过氧化氢酶。本试剂盒通过检测A520来测定过氧化物酶催化下由过
氧化氢氧化生色底物产生的红色产物,受干扰的因素小,检测灵敏度高,可以检测出低达1U/ml的过氧化氢酶。
Ø 本试剂盒可以检测全血、红细胞裂解产物、血清、组织匀浆产物、细胞裂解产物等生物样品中的过氧化氢酶的活性。一个试剂盒
共可以进行100次检测。
使用方法:
配制250mM过氧化氢溶液。本试剂盒提供的过氧化氢浓度约为1M。由于过氧化氢不是非常稳定,使用前需自行测定过氧化氢的
实际浓度。把浓度约为1M的过氧化氢用本试剂盒提供的过氧化氢酶检测缓冲液稀释100倍,使过氧化氢的浓度约为10mM。测定
A240。